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技术点心:减少超滤浓缩发生蛋白沉淀

发布时间:2015-11-13      点击次数:1241

蛋白相较于核酸,因其承担生物学功能,有“活性”特征,蛋白样品的处理要求操作者有更好的经验和技巧。拿蛋白浓缩这一常规操作来讲,根据样品规模(体积)、通量(样品个数)、混合物的复杂程度及相关设备配套要求,就分为盐析、透析、冻干、分子筛色谱等等不同选择。而超滤,不论从操作的简便性还是处理效率来说,都算优势突出,成为蛋白浓缩/除盐/缓冲液置换等蛋白综合处理的。掌握好超滤技巧,我们就能更好地保全蛋白活性和得率。针对于蛋白在超滤浓缩过程中容易发生沉淀这个现象,就超滤管的使用提出一些建议,供您灵活选用。

蛋白如果浓缩过快或者过度浓缩都有可能引起蛋白沉淀。我们建议蛋白浓缩后的zui终浓度不超过20mg/ml。对于对浓缩速度敏感而容易沉淀的蛋白,我们建议的改进方法是:

1)离心力降为推荐离心力的30%-50%;

2)改选择截留分子量更大的过滤装置(如原本选用10k,此时可以选择30k);

3)在浓缩过程中取出超滤管,用枪头反复吹吸几次。

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