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如何结合需求购买离心机?PBMC 单核细胞的密度梯度离心分离篇
来源:技术文章    发布时间:2020-01-10    浏览:409次

      测定细胞免疫功能首先要从人或动物外周血或组织中获取有活性的细胞,如淋巴细胞、巨噬细胞、粒细胞等。血液主要由血清和血细胞组成,主要包括红细胞,白细胞和血小板等。白细胞还可以细分为淋巴细胞和单核细胞等。由于这些细胞具有简单的细胞核,统称为外周血单核细胞 (PBMC)。 取得有活性的细胞应根据不同的实验、检验和治疗的目的,采用不同方法,需要考虑的因素有:1细胞纯度,2细胞获得量,3细胞活力,4使用方法的简易程度和本室条件等。PBMC 单核细胞可通过 Ficoll 密度梯度离心的方法,从血液中进行分离。

       在 Ficoll 密度梯度离心的过程中,需要注意的有:
● 使 Ficoll-Paque Plus 和 PBS 升至室温,并用 70% 乙醇消毒血袋外部,良好的温度 (18-20℃) 控制有利于稳定 Ficoll 的密度,可以实现更好的分离效果
● 血液与 PBS 的比例保持 1:1,拧紧盖后颠倒混合几次
● 可以使用 ep 25 mL 锥底管,并轻轻的将血液/PBS 混合物铺置 Ficoll 上
● 离心参数:400 x g, 20 ℃,加减档 0/0,防止离心结束后的刹车震动,防止产生重悬,更利于良好分层。随后开启“Atset”功能,可以在达到指定转速后开始计时,离心 30 分钟
● 使用 PBS 洗涤细胞,离心除去残余的 Ficoll 液,400 x g, 20 ℃,10 分钟,重复几次
       综上所述,一台搭配了适当的水平转子的 5804R 多用途离心机会是您入门级的选择,同时又不失其专业性。
 

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