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反相高效色谱柱的冲洗再生方法

发布时间:2019-12-06      点击次数:541

通常情况下,对于常用的反相色谱柱出现了严重的柱效降低、分离度差时,可以试试按照以下流程来对色谱柱进行冲洗、再生:
1、20倍柱体积水:乙腈= 95%:5% (用于移除系统中缓冲盐,可根据常用缓冲盐浓度调整比例)
2、20倍柱体积 乙腈
3、5倍柱体积 异丙醇
4、20倍柱体积 正己烷
5、20倍柱体积 乙腈
6、20倍柱体积 水:乙腈=95%:5% (可与步骤1保持相同的比例)
7、用所需的流动相比例重新平衡色谱柱
关于色谱柱的冲洗再生,基本上都是个性化的,也有很多相关文章,每支色谱柱的实际情况都会有所不同,适的再生条件需要经过实际摸索和调整。
在色谱柱冲洗时,很多实验室习惯用冲洗时间来评价是不是达到我们想要的效果。例如某位师傅告诉你把这个柱子冲半个小时就可以了。严格来讲色谱柱的冲洗应该使用冲洗的溶剂体积来评价冲洗效果,柱体积的计算公式如下:


例如一根4.6mm内径,150mm柱长的色谱柱柱体积为:


如果要用20倍柱体积的乙腈冲洗色谱柱就需要约34mL的乙腈,假设柱流量是1mL/min,那就要用乙腈冲洗34分钟,当柱流量是1.5 mL/min时就需要用乙腈冲洗约23分钟。
 

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